Fermentas RNase Inhibitor RNA酶抑制劑EO0381  的詳細介紹

Fermentas RNase Inhibitor RNA酶抑制劑EO0381
產品信息：

特點

• 應用范圍廣，適合多種使用條件。
• 保護RNA，使其免受降解。zui高有效溫度達55°C。

應用

• 抑制RNA降解，應用如下：
  一 體外轉錄（1）；
  一 cDNA合成（2）；
  一 體外翻譯（3）；
  一 分離含有mRNA-蛋白復合物的哺乳動物細胞組分（3）;
  一 RNA擴增（4）。
• RNA純化和保存。
• 分離和鑒定特殊的核酸酶活性（5）。
• 腫瘤抑制研究（6）。

說明

Ribolock™ RNase Inhibitor按1:1比例非競爭性與RNases A（見圖1）、B和C結合，從而抑制RNases A、B和C的活性。但是其不能抑制真核生物RNases T1、T2、U1、U2、CL3和原核生物RNases I和H的活性。

來源

大腸桿菌菌株，含有編碼哺乳動物核酸酶抑制劑的克隆基因。

分子量

49.6 kDa，單體。

活性單位定義

1個活性單位是指50%抑制5? ng RNase A活性所需Ribolock™ RNase Inhibitor用量。

抑制劑活性分析混合物：100 mM Tris-HCl （pH 7.5）, 1.2 mM EDTA, 0.1 mg/ml BSA, 100 ng/ml RNase A, 0.1 mg/ml [³H]-RNA, 50 mg/ml酵母RNA, 8 mM DTT。

保存緩沖液

保存緩沖液組分：
20 mM HEPES-NaOH （pH 7.5）, 50 mM NaCl, 8 mM DTT, 0.5 mM ELUGENT變性劑和50% （v/v）甘油。

質量控制

相關測試表明無內切或外切脫氧核糖核酸酶、磷酸酶、核糖核酸酶污染。功能測試方法為RNA和cDNA的合成。

抑制與失活

• 抑制劑：常用變性劑（SDS、尿素）和所有氧化劑（對-氯汞基苯甲酸鹽、溶解氧、高氧化狀態(tài)的離子）可強烈抑制RiboLock™ RNase Inhibitor并釋放被結合的RNase。
• 失活：75°C加熱10分鐘；70°C加熱10 分鐘仍然可檢測到活性殘留。

備注

• 保存緩沖液中的DTT可確保Ribolock™ RNase Inhibitor長期保存的穩(wěn)定性，其并非抑制劑活性發(fā)揮的必需品。
• 推薦濃度 – 1 unit/μl/μlμl反應體系。

圖1。Ribolock™ RNase Inhibitor對RNase A的抑制效果分析。
37°C時，人RNA （1? μg）中添加20 u Ribolock™ RNase Inhibitor和不同量的RNase A（不含DNase和蛋白酶，#EN0531）。
M – RiboRuler™ High Range RNA Ladder
C1 – 人總RNA
C2 – 人總RNA，含RNase A
1-4 – 人總RNA，含RiboLock™ Ribonuclease Inhibitor和RNase A

 

圖2。Ribolock™ RNase Inhibitor熱穩(wěn)定性。
人的總RNA （1? μg）中添加20 u Ribolock™ RNase Inhibitor和50 pg RNase A（不含DNase和蛋白酶，#EN0531），不同溫度條件下孵育。
M – RiboRuler™ High Range RNA Ladder
C1 – 人總RNA
C2 – 人總RNA，含RNase A
1-5 – 人總RNA，含RiboLock™ Ribonuclease Inhibitor和RNase A